VirusStars 慢病毒包裝細胞系 CL110001的制備方法

　　慢病毒載體(Lentiviral vector)較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達siRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達siRNA/miRNA,實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動物細胞組織中快速研究基因功能，以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。
 

　　VirusStars 慢病毒包裝細胞系 CL110001制備：
 

　　細胞：慢病毒包裝常用人胚腎細胞(HEK, human embryonic kidney)293  T，其含有SV40病毒的大T抗原蛋白編碼基因，轉染效率高。但其貼壁性不好，所以需要使用多聚賴氨酸包被的培養皿增加其吸附性。多聚賴氨酸培養皿可購買，也可自行制備。轉染前，細胞密度控制在40-70%比較好。
 

　　DNA：每10 cm培養皿約含5x106 293T細胞，需用30-40 ug不含內毒素的質粒進行轉染。質粒的純度對慢病毒載體的包裝效率非常關鍵。不同的包膜蛋白表達載體，其使用量也不同。
 

　　轉染：經濟的轉染方法是磷酸鈣轉染法，雖然其溶液配置影響因素多，不易穩定重復得到轉染結果。其它方法有脂質體法和PEI法。轉染48-60后可以收集上清，通過低速離心，然后濾膜過濾可以去除上清中的細胞碎片。
 

　　如果使用VSV-G包膜蛋白的話，可以通過兩次超速離心進行濃縮，從而可以獲得滴度高達1011-1012IU/ml的慢病毒載體。之后可以將病毒載體溶解在PBS， HBSS或者DMEM中，并置于-800C儲存。
 

　　儲存溶液添加血清會幫助提高病毒凍融時的存活率，然而有些病毒在侵染細胞時，血清會有干擾，所以需要依據具體病毒種類考慮是否添加血清。